上海ELISA試劑盒滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型成為有色的氧化型，ELISA檢查試劑盒出現(xiàn)色彩反響。因而，可通過(guò)底物的色彩反響來(lái)斷定有無(wú)相應(yīng)的免疫反響，色彩反響的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。
上海ELISA試劑盒測(cè)定方法中有三個(gè)必要的試劑：
?。?）固相的抗原或抗體，即"免疫吸劑"（immunosorbent）；
?。?）酶符號(hào)的抗原或抗體，稱(chēng)為“酶聯(lián)物"、“聯(lián)絡(luò)物"（conjugate）；
?。?）酶反響的底物。依據(jù)試劑的來(lái)歷和標(biāo)本的狀況以及檢查的具體條件，可規(guī)劃出各種不同類(lèi)型的檢查方法。
ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所致使的盛行癥、ELISA檢查試劑盒寄生蟲(chóng)病及非盛行癥等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定，依據(jù)現(xiàn)已運(yùn)用的作用，認(rèn)為ELISA試劑盒法具有活絡(luò)、特異、簡(jiǎn)略、敏捷、安穩(wěn)及易于自動(dòng)化操作等特色。
有的試劑盒中所設(shè)陰性對(duì)照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，致使反響后發(fā)作的本底或許較正常人血清的本底低得多。
上海ELISA試劑盒在實(shí)驗(yàn)條件（包括試劑）較難保證安穩(wěn)的狀況下，這種差異法較為合適。
ELISA試驗(yàn)時(shí)，注意事項(xiàng)如下：
1.正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)別離以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，說(shuō)明有非特異性反響，可采用羊血清、兔血清或BSA等關(guān)閉。
2.在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)試驗(yàn)條件的挑選是很重要的，其間包含：
?。?）固相載體的挑選：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方法可所以凹孔平板、試管、珠粒等。現(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體，在運(yùn)用前均可進(jìn)行挑選：用等量抗原包被，在同一試驗(yàn)條件下進(jìn)行反響，查詢(xún)其顯色反響是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否出色。
（2）包被抗體（或抗原）的挑選：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有必定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相一同，查詢(xún)陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。挑選OD值大而蛋白量少的濃度。關(guān)于大都蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)一般為1～10μg／ml。
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更新時(shí)間：2019-09-18 
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